Rysunek
23. Homologiczna wymiana genu H1˚. a) wektor o długości 5,1 kpz
uzyskany z biblioteki genów (odcinek XbaIH1˚) zmodyfikowano
przez usunięcie 170 kodonów H1˚ od strony 5’ w
których miejsce wstawiono gen neo, dodatkowo na zewnątrz od
regionu homologicznego (odcinki o długości 2,8 kpz i 1,2 kpz) dołączono
gen tk z promotorem PGK pozwalający na selekcję negatywną. b) locus H1˚
po rekombinacji homologicznej, zamiast genu H1˚ w miejscu tym znajduje
się gen neo (selekcja pozytywna). Gen neo wprowadza dodatkowe miejsce
cięcia przez restryktazę PstI, w wyniku czego produktem PCR będzie
odcinek długości 3,6 kpz w komórkach które włączyły
transgen w locus H1˚, zaś w pozostałych komórkach produkt cięcia
będzie miał długość 5,6 kpz. (wg Sirotkin i wsp., 1995, zmodyfikowano).